親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結(jié)合。生物素在人體內(nèi)是不能單獨起作用的，它需要與其他酶、氨基酸脂肪衍生物等結(jié)合來綜合調(diào)控。生物素結(jié)合常數(shù)即表示了它與其他有機分子結(jié)合能力的大小。
現(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈親和素（strepavidin）。生物素（biotin）又稱維生素H，分子量244.31，存在于蛋黃中。用化學方法制成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物。親和素與生物素的結(jié)合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于1個親和素分子有4個生物素分子的結(jié)合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELIS偶聯(lián)起來，就可大提高ELISA的敏感度。
親合素主要包括卵白親合素、鏈親合素、卵黃親合素及類親合素等。后兩種因其特異性親合力低，研究不多，前兩種目前已深入研究并得到廣泛應用：
1、卵白親和素：親合素又稱卵白蛋白或抗生物素，分子量為68000，pI 10～10.5；在pH9～13緩沖液中性質(zhì)均穩(wěn)定，耐熱并耐多種蛋白水解酶的作用。天然親合素為堿性蛋白，由4個相同的亞單位構(gòu)成4聚體；每個親合素亞單位通過其結(jié)構(gòu)中的色氨酸殘基與生物素中的Ureido環(huán)（I環(huán)）結(jié)合。因此，1個親合素分子存在4個與生物素分子結(jié)合位點，其結(jié)合常數(shù)（Ka）高 達1015mol／L。通常，親合素的活性單位是以親合素結(jié)合生物素的量來表示的，即以能結(jié)合1Pg生物素所需要的親合素量為1個親合素活性單位。一般1Pg親合素約含13～15個活性單位。
2、鏈霉親和素：鏈霉親合素（SA）是與親合素（A）有類似生物學特性的一種蛋白質(zhì)。是由Streptomyces avidin菌在培養(yǎng)過程中分泌的一種蛋白質(zhì)產(chǎn)物，SA也可通過基因工程手段。SA分子量為65000，由4條序列相同的肽鏈構(gòu)成，每條SA肽鏈可以結(jié)合1個生物素分子。因此與A一樣，每個SA分子也具有4個可與生物素分子結(jié)合位點，其結(jié)合常數(shù)與A相同為1015mol／L。約為抗原抗體間ka（105～1011 mol/L）的1萬倍以上。SA與A的ka雖然相同，但在實際應用中其檢測靈敏度明顯優(yōu)于A，其原因是SA為 略偏酸性的蛋白。SA的每條肽鏈含159個氨基酸殘基，其中賴氨酸、精氨酸等堿性氨基酸的含量比一般親合素少，反之含酸性氨基酸較多，其等點為6.0，較A（pI＝10）為低，同時在結(jié)構(gòu)中SA不含任何糖基，而A含糖可高達10％。A的高pI及高含糖結(jié)構(gòu)導致在聚苯乙烯板和硝酸纖維素膜上或與組織細胞DNA結(jié)合時，易產(chǎn)生一定程度的非特異性結(jié)合，造成較高的顯色背景，而SA較A在應用中明顯克服了這一缺點。
在線客服
